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    Hieff NGS? mRNA Isolation Master Kit mRNA純化試劑盒

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格/元

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit

    mRNA純化試劑盒

    12603ES24

    24 T

    616

    12603ES96

    96 T

    2266

     

    產品描述

     

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翌圣生物自主研發的專門用于純化mRNA的磁珠試劑盒。其中的mRNA Capture beads為偶聯了Oligo(dT)的微米級順磁性微球,通過與帶有poly(A)尾巴的mRNA相結合,將mRNA從10 ng-4 μg完整度良好的總RNA進行分離純化。

     

    產品組分

     

    產品組分

    組分名稱

    12603ES24

    12603ES96

    12603-A

    mRNA Capture Beads

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-B

    Beads Binding Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-C

    Beads Wash Buffer

    15 mL

    60 mL

    12603-D

    Tris Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-E

    Nuclease-free water

    1 mL

    4 mL

     

    運輸與保存方法

     

    冰袋運輸。

    2-8℃保存,效期一年。避免冷凍!

     

    注意事項

     

    1.磁珠使用前務必要回溫至室溫,并充分混勻,否則可能影響樣品的回收效率。

    2.操作過程要嚴格保證無RNase和核酸污染。

    3.本產品和其他試劑配套使用時,請按照具體實驗說明來進行操作。

    4.想要獲得好的純化效果,需要有完整度良好的總RNA,確保RIN值在7.0及以上。

    5.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    6.本產品僅用作科研用途! 

     

    使用方法

     

    自備材料

    磁力架,Nuclease-free離心管。

     

    操作流程

     

     

    圖片1.png 

    1 mRNA純化試劑盒操作流程

     

    操作步驟

     

    3.1 實驗前準備

    mRNA Capture Beads2-8℃取出,靜置使其溫度平衡至室溫(約30 min)。

    3.2 樣本準備

    在一個Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water10 ng-4 μg總RNA稀釋至50 μL,冰上放置備用。 

    3.3 mRNA與磁珠的結合

    顛倒或渦旋振蕩混勻磁珠,吸取50 μL磁珠懸液加入50 μL RNA樣品中,用移液器反復吹打6次,

    使其充分混勻。

    ② 將磁珠與RNA的混合物置于PCR儀中,65℃,5 min;25,5 min;25,hold,完成RNA與捕獲磁珠的結合。

    ③ 將樣品置于磁力架中,室溫靜置5 min,使mRNA與總RNA分離,小心移除上清。

    3.4 樣本的洗滌

    將樣品從磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重懸磁珠,用移液器反復吹打6次以徹底混勻。

    ② 將樣品置于磁力架中,室溫靜置5 min,小心移除上清。

    重復上一步驟,共洗滌兩次。

    3.5 mRNA樣本第一輪洗脫

    將樣品從磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重懸磁珠,用移液器反復吹打6次以徹底混勻。

    將樣品放置于PCR儀中,80℃,2 min;25℃,hold,mRNA洗脫下來。

    3.6 mRNA與磁珠的再次結合 

    ① 將樣品從PCR儀中取出,加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反復吹打6次以徹底混勻。

    室溫孵育5 min,使mRNA結合到磁珠上。

    將樣品置于磁力架中,室溫靜置5 min,小心移除上清。

    3.7 樣本的洗滌

    將樣品從磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重懸磁珠,用移液器反復吹打6次徹底混勻,將樣品重新放回至磁力架中,室溫靜置5 min,然后吸除全部上清。

    【注】最后需要用10 μL移液器吸干凈殘留液體。

    3.8 mRNA樣本終洗脫

    方案一用于逆轉錄反應。

    將樣品從磁力架上取出,加入12 μL Nuclease-free water重懸磁珠,用移液器吹打6次以徹底混勻。將樣品置于PCR儀中80℃,2 min后,立即置于磁力架上,室溫靜置5 min。待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。

    方案二用于RNA文庫的構建。

    可根據相關試劑盒說明書加入相應體積的Frag/Primer Buffer,進行文庫構建。

    【注】:樣品可置于冰上繼續進行NGS文庫構建或其他分析應用(建議立即進行后續反應),也可以置于-80℃保存。

     

    HB220218

     

    400-6111-883

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