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    Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價(元)

    Hifair®  One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

    11143ES50

    50 T

    385.00

    305.00

    11143ES70

    200 T

    1425.00

    1145.00

     

    產品描述

     

    Hifair®  One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA為模板進行定量PCR反應的試劑盒。在實驗的過程中,逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行,簡化了實驗操作,降低了污染的風險。本試劑盒以RNA為模板,使用基因特異性引物,利用耐熱Hifair®  Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA,并以此為模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase作用下,配合優化的緩沖體系能夠特異靈敏的對RNA模板進行精確定量。同時Buffer中額外添加了有效抑制非特異性PCR擴增的組分和提高擴增能力的促進因子,使定量PCR結果可以在寬廣范圍內更加真實有效。

    本試劑盒以Kit形式提供,2×Hifair®  SG buffer包含優化的緩沖體系和dNTPs等,優化了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升PCR反應擴增效率的因子,適用于SYBR Green標記的高特異性檢測系統。此外,Hifair® UH  Enzymes包含比例優化的Hifair®  Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

     

    產品組分

     

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    11143ES50(50 T)

    11143ES70(200 T)

    11143-A

    2×Hifair®  SG buffer

    500 μL

    4×500 μL

    11143-B

    Hifair® UH  Enzymes

    50 μL

    200 μL

    11143-C

    Hieff® 50×High Rox

    50 μL

    200 μL

    11143-D

    Hieff® 50×Low Rox

    50 μL

    200 μL

    11143-E

    RNase-free ddH2O

    500 μL

    4×500 μL

    : SG buffer為SYBR Green buffer的簡寫,UH為UNICON-Hifair的簡寫。

     

    適用機型

     

    High Rox適用機型 ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus;

    Low Rox 適用機型 ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

    Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

    不需要Rox校正的儀器型號

    Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

    Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

    Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

    Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;

    Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.

     

     

     

    運輸與保存方法

     

    冰袋運輸。

    -20避光儲存,有效期一年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。

     

    注意事項

     

    1. 實驗過程中請使用RNase-free耗材。

    2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

    3. 本產品僅作科研用途!

     

    反應體系(以20 μL為例)

     

    組分

    體積(μL)

    終濃度

    2×Hifair®  SG buffer

    10

    Hifair® UH  Enzymes

    1

    -

    Hieff® 50×High Rox or Low Rox

    0.4

    Forward Primer (10 μmol/L)

    0.4

    0.2 μmol/La

    Reverse Primer (10 μmol/L)

    0.4

    0.2 μmol/La

    模板 RNA

    Total RNA 1 pg-1 μg

    -

    RNase-free ddH2O

    to 20d

    -

    :使用前務必充分混勻,避免劇烈震蕩產生過多氣泡。

    a. 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μmol/L,也可以根據情況在0.1-1.0 μmol/L之間進行調整。

    b. 參比染料Rox的添加,可根據不同儀器型號進行選擇,具體可參考【適用機型】。

    c. 模板稀釋:qPCR靈敏度極高,建議將模板進行稀釋使用,控制CT值在20-30之間適宜。

    d. 反應體系:推薦使用20 μL或50 μL,以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

    e. 體系配制:請于超凈工作臺內配制,并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

     

    標準擴增程序

     

    反應階段

    溫度

    時間

    循環數

    逆轉錄

    42℃b

    10 mina

    1

    預變性

    95℃

    5 min

    1

    擴增反應

    95℃

    10 sec

    40

    60℃

    30 sec

    熔解曲線d

    儀器默認設置

    1

    :

    a. 逆轉錄:對于一些極低豐度的基因可以將逆轉錄時間適當延長至15 min。

    b. 溫度:對于含復雜二級結構或高GC含量的RNA模板,可將逆轉錄溫度提高到55℃,有助于提升靈敏度。

    c. 熒光信號采集:不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同,請根據最短時間限制進行設置。

    d. 熔解曲線:通常情況下可以使用儀器默認程序。  

     

    HB220624

    400-6111-883

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