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    Hieff UNICON? Power qPCR SYBR Green Master Mix(抗體法,Low Rox)

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品名稱

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價(元)

    Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法,Low Rox)

    11196ES03

    1 ml

    383.00

    223.00

    11196ES08

    5×1ml

    1653.00

    663.00

    11196ES50

    10×5 ml

    12533.00

    6613.00

    11196ES60

    20×5 ml

    19833.00

    12563.00


    產品描述

     

    本產品是2×實時定量PCR擴增的預混合溶液。具有高特異性和高檢出率的特點。采用的抗體法熱啟動Taq DNA聚合酶,在預變性溫度(95℃)加熱30 sec,急速釋放出Taq DNA Polymerase活性。UNICON® Taq抗體可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導致的非特異性擴增。同時配方額外添加了有效抑制非特異性PCR擴增的組分和均衡不同GC含量(30%-70%)基因擴增的促進因子。使定量PCR結果可以在寬廣范圍內更加真實有效。

    預混液含有所有PCR擴增的組分。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行實時熒光定量PCR,大大簡化操作過程,降低污染幾率。


    運輸與保存方式
     

    冰袋運輸。-20℃避光儲存,有效期18個月。

    本品避免反復凍融。產品中含有熒光染料SYBR Green I,保存或配制反應體系時需避免強光照射。


    注意事項
     

    1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒(貨號:11123ES),以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。

    2. 產品解凍后如果發現不溶物,請上下顛倒混勻至溶液澄清,不影響試劑性能。

    3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
    4. 本產品僅作科研用途!


    反應體系(推薦冰上配制)
     

    組分

    體積(μl)

    體積(μl)

    終濃度

    Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix (抗體法,Low Rox)

    25

    10

    Forward Primer (10 μM)

    1

    0.4

    0.2 μM

    Reverse Primer (10 μM)

    1

    0.4

    0.2 μM

    模板DNA

    X

    X

    -

    無菌超純水

    to 50

    to 20

    -

     

    【注】:使用前務必充分混勻,避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
    a) 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據情況在0.1-1.0 μM之間進行調整。
    b) 模板濃度:如模板類型為未稀釋cDNA原液,使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。
    c) 模板稀釋:cDNA原液建議5-10倍稀釋,最佳模板加入量以擴增得到的CT值在20-30個循環為好。
    d) 反應體系:推薦使用20 μl或50 μl,以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
    e) 體系配制:請于超凈工作臺
    內配制,并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

     

    擴增程序(兩步法)

    擴增程序(三步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    30 sec

    1

    預變性

    95℃

    30 sec

    1

    變性

    95℃

    10 sec

    40

    變性

    95℃

    10 sec

    40

    退火/延伸

    60℃

    30 sec★

    退火

    55-60℃

    20 sec

    熔解曲線階段

    儀器默認設置

    1

    延伸

    72℃

    20 sec★

    熔解曲線階段

    儀器默認設置

    1

    【注】:高特異性可選擇兩步法,高效率擴增可選擇三步法。
    a) 預變性
    時間:本反應條件適合大多數基因擴增,如果遇到含有復雜結構的基因可適當增加預變性時間至3-5 min。
    b) 退火溫度和時間:請根據引物和目的基因的長度進行調整。
    c) 熒光信號采集(★):請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置,幾種常見儀器的時間設定如下:
    30 sec以上:Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast;Roche Applied Science: LightCycler 480;Bio-Rad: CFX96
    31 sec以上:Applied Biosystems: 7300
    34 sec以上:Applied Biosystems: 7500
    d) 熔解曲線:通常情況下可以使用儀器默認程序。

     

    結果分析
     

    定量實驗至少需要三個生物學重復。反應結束后需要確認擴增曲線及熔解曲線。

    1) 擴增曲線:標準擴增曲線為S型。

    Ct值落在20-30之間時,定量分析最準確;

    Ct值小于10,需要將稀釋模板后,重新進行實驗;

    Ct值介于30-35之間時,需要提高模板濃度,或者增大反應體系的體積,以提高擴增效率,保證結果分析的準確性;

    Ct值大于35時,檢測結果無法定量分析基因的表達量,但可用于定性分析。

    2) 熔解曲線:

    熔解曲線單峰,表明反應特異性好可以進行定量結果分析;若熔解曲線出現雙峰或者多峰,則不能進行定量分析。

    熔解曲線出現雙峰,需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標峰是引物二聚體還是非特異性擴增。

    如果是引物二聚體,建議降低引物濃度,或者重新設計擴增效率高的引物。

    如果是非特異性擴增,請提高退火溫度,或者重新設計更高特異性的引物。

     

    引物設計指南
     

    1)推薦引物長度25 bp左右。擴增產物長度150 bp為佳,不要低于100 bp,可以在100 bp-300 bp內選擇。

    2)正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。

    3)引物堿基分布要均勻,避免出現連續的4個相同堿基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。

    4)引物內部或者正反兩條引物間最好避免出現有3個堿基以上的互補序列。

    5)引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物3’端有2個堿基以上的非特異性互補。

    6)設計完成的引物需要進行擴增效率的檢測,只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。

     

    適用機型
     

    Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA 7, QuantStudio Dx, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

    Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P.

     


    相關產品

     

    產品名稱

    貨號

    規格

    Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit  (gDNA digester plus)

    11121ES60

    100 T

    Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) 

    11123ES60

    100 T

    Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )

    11201ES08

    5 mL

    Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus)

    11202ES08

    5 mL

    Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) 

    11203ES08

    5 mL

    Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

    11195ES08

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    11196ES08

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    11197ES08

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    Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,No Rox)

    11198ES08

    5 mL

    Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,Low Rox)

    11199ES08

    5 mL

    Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗體法,High Rox)

    11200ES08

    5 mL


    HB210824

    400-6111-883

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