產品說明書
FAQ
COA
已發表文獻
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hifair? V Reverse Transcriptase 第五代耐熱逆轉錄酶 | 11300ES92 | 10000 U | 1623.00 |
11300ES93 | 50000 U | 5623.00 |
產品描述
Hifair? V Reverse Transcriptase是在Hieff? M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎上通過基因工程技術得到新逆轉錄酶，與Hieff? M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。Hifair? V Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
11300ES92 (10000 U) | 11300ES93 (50000 U) | ||
11300-A | Hifair? V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
11300-B | 5×Hifair? V Buffer | 250 μL | 1.25 mL |
產品應用
一步法RT-qPCR；基因克隆；熒光定量。
活性定義
以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項
1. 請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2. 所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解；
3. 為保證高效率逆轉錄，建議使用高質量的RNA樣本；
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
or 1 μL | |
or 1 μL | |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 13 μL |
5×Hifair? V Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair? V Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 μL |
3. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 15-30 min |
85℃ | 5 min |
【注】
1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至50-55℃。
3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活。
※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
※ 該逆轉錄酶也適用于一步法RT-qPCR，推薦每25 μL反應體系，添加10-20 U逆轉錄酶，也可根據實際情況逐步增加逆轉錄酶用量。
相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格（元） |
10603ES05/10 | 2/10 KU | 216/916 | |
Hieff? HotStart Taq DNA Polymerase（配體法熱啟動DNA聚合酶） | 10110ES72/80 | 250/1000 U | 186/636 |
Hieff UNICON? HotStart Taq DNA Polymerase（抗體法熱啟動Taq酶） | 10113ES60/76 | 100/500 U | 216/656 |
11205ES08 | 5 mL | 740 | |
11208ES08 | 5 mL | 5565 | |
10303ES60/76 | 100/500 U | 683/3083 | |
10128ES72/80 | 0.25/1 mL | 253/853 | |
10125ES72/80 | 0.25/1 mL | 116/353 |
HB210923
400-6111-883
