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    Hieff UNICON? Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

    11184ES03

    1 mL

    383.00

    223.00

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

    11184ES08

    5×1 mL

    1653.00

    663.00

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

    11184ES50

    50×1 mL

    12533.00

    6613.00

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

    11184ES60

    100×1 mL

    19833.00

    12563.00

     

    產品描述

     

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix2×實時定量PCR擴增的預溶液,具有高靈敏度和高特異性的特點,顏色為藍色,具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動,可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導致的非特異性擴增。同時配方添加了提升PCR反應擴增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因擴增的促進因子,使定量PCR可以在寬廣的定量區域內獲得良好的線性關系。

    本產品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye,適用于所有qPCR儀器,無需在不同的儀器上調整ROX的濃度,只需在配制反應體系時加入引物和模板即可進行擴增。

     

    運輸保存方式

     

    冰袋運輸。-20避光儲存,有效期18個月。

    本品避免反復凍融。產品中含有熒光染料SYBR Green I,保存或配制反應體系時需避免強光照射。
     

    注意事項

    1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒(貨號:11141ES),以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
    2. 解凍后Master Mix可能出現絮狀或白色沉淀,手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清,不影響試劑性能。
    3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。   

    4. 本產品僅作科研用途!

     

    反應體系

     

    組分

    體積(μL

    體積(μL

    終濃度

    Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix

    25

    10

    Forward Primer (10 μM)

    1

    0.4

    0.2 μM

    Reverse Primer (10 μM)

    1

    0.4

    0.2 μM

    模板DNA

    X

    X

    -

    無菌超純水

    to 50

    to 20

    -

    使用前務必充分混勻,避免劇烈震蕩產生過多氣泡。

    a) 引物濃度通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據情況0.1-1.0 μM之間進行調整。

    b) 模板濃度:如模板為未稀釋cDNA原液,使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。

    c) 模板稀釋:cDNA原液建議5-10倍稀釋,最佳模板加入量以擴增得到的Ct值在20-30個循環為好。     

    d) 反應體系:推薦使用20 μL50 μL,以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

    e) 體系配制:請于超凈工作臺內配制,使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

     

    標準程序

                                             

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95

    2 min

    1

    變性

    95

    10 sec

    40

    退火/延伸

    60

    30 sec

    熔解曲線階段

    儀器默認設置

    1

     

    快速程序

     

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95

    30 sec

    1

    變性

    95

    3 sec

    40

    退火/延伸

    60

    20 sec

    熔解曲線階段

    儀器默認設置

    1

     快速程序適用于絕大多數基因,個別復雜二級結構基因可嘗試標準程序。

    a) 退火溫度和時間:請根據引物和目的基因的長度進行調整。

    b) 熒光信號采集(★):請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置,幾種常見儀器的時間設定如下:

    20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast

    31 sec:Applied Biosystems 7300

    32 sec:Applied Biosystems 7500

    c) 解曲線通常情況下可以使用儀器默認程序。

     

    結果分析

     

    定量實驗至少需要三個生物學重復。反應結束后需要確認擴增曲線及解曲線。

    1) 擴增曲線標準擴增曲線為S型。

    Ct值落在20-30之間時,定量分析最準確;

    Ct值小于10,需要將稀釋模板后,重新進行驗;

    Ct值介于30-35之間時,需要提高模板濃度,或者增大反應體系的體積,以提高擴增效率,保證結果分析的準確性;

    Ct值大于35時,檢測結果無法定量分析基因的表達量,但可用于定性分析。

    2) 熔解曲線

    熔解曲線單峰,表明反應特異性好可以進行定量結果分析;若解曲線出現雙峰或者多峰,則不能進行定量分析。

    熔解曲線出現雙峰,需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標峰是引物二聚體還是非特異性擴增。

    如果是引物二聚體,建議降低引物濃度,或者重新設計擴增效率高的引物。

    如果是非特異性擴增,請提高退火溫度,或者重新設計更高特異性的引物。

     

    引物設計指南

     

    1. 推薦引物長度25 bp左右。擴增產物長度150 bp為佳,可以在100 bp-300 bp內選擇。

    2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2。引物Tm值60-65為佳。

    3. 引物堿基分布要均勻,避免出現連續的4個相同堿基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。

    4. 引物內部或者正反兩條引物間最好避免出現3個堿基以上的互補序列。

    5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物3’端有2個堿基以上的非特異性互補。

    6. 設計完成的引物需要進行擴增效率的檢測,只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。

     

    適用機型

     

    ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;

    Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;  

    Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

    Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

    Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

    Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

    Thermo Scientific: PikoReal Cycler;

    Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR. 

     

    相關產品

     

    產品名稱

    貨號

    規格

    促銷價(元)

    Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT

    11141ES60

    100T

    1383.00

    HB210701

    400-6111-883

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