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    Hifair? Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價(元)

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

    11145ES50

    50 T

    385.00

    305.00

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit

    11145ES70

    200 T

    1455.00

    1145.00

     

    產品描述

     

    Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA為模板進行定量PCR反應的試劑盒。在實驗的過程中,逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行,簡化了實驗操作,降低了污染的風險。本試劑盒以RNA為模板,使用基因特異性引物,利用耐熱Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA,并搭配使用探針和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase,配合優化的緩沖體系能夠特異靈敏的對RNA模板進行精確定量。

    本試劑盒以預混的Mix形式提供,2×Hifair® Ⅲ P buffer包含優化的緩沖體系和dNTPs等,優化了有效抑制非特異性 PCR擴增的因子和提升PCR反應擴增效率的因子,適用于熒光標記探針的高特異性檢測系統。此外,Hifair® UH Ⅲ Enzymes包含比例優化的Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor及UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

     

    產品組分

     

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    11145ES50 (50 T)

    11145ES70 (200 T)

    11145-A

    2×Hifair® Ⅲ P buffer

    500 μL

    2×1 mL

    11145-B

    Hifair® UH Ⅲ Enzymes

    50 μL

    200 μL

    11145-C

    Hieff® 50×High Rox

    20 μL

    80 μL

    11145-D

    Hieff® 50×Low Rox

    20 μL

    80 μL

    11145-E

    RNase free ddH2O

    500 μL

    2×1 mL

    【注】P buffer 為Probe buffer 的簡寫,UH 為UNICON-Hifair 的簡寫。

     

    適用機型

     

    High Rox 適用機型:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™

    Low Rox 適用機型:ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

    Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

    不需要 Rox 校正的儀器型號:

    Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

    Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

    Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96

    Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

     

    運輸和保存方法

     

    冰袋運輸。-20℃避光保存,有效期1年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。

     

    注意事項

     

    1. 實驗過程中請使用 RNase free 耗材。

    2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

     

    反應體系(以 20 μL為例

     

    組分

    加入量

    終濃度

    2×Hifair® Ⅲ P buffer

    10 μL

    Hifair® UH Ⅲ Enzymes

    1 μL

    -

    Hieff® 50×High Rox or Low Rox

    0.4 μL

    -

    Gene Specific Primer Forward (10 µM)

    0.4 μL

    0.2 μM

    Gene Specific Primer Reverse (10 µM)

    0.4 μL

    0.2 μM

    TaqMan Probe (10 µM)

    0.2 μL

    0.1 μM

    模板 RNA

    Total RNA: 1 pg-1 µg

    -

    RNase free ddH2O

    to 20 μL

    -

    【注】:

    a 所有試劑使用前應充分混勻。

    b 參比染料:Rox的添加,可根據不同儀器型號進行選擇,具體可參考【適用機型】。

    c 引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據情況在0.1-1.0 μM之間進行調整。

    d 探針濃度:探針終濃度可在50 nM-250 nM之間調整。

    e 體系配制:請于超凈工作臺內配制,并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管;推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

    f 模板稀釋:一步法RT-qPCR靈敏度極高,推薦將模板稀釋后(如稀釋至2-5 μL/樣本)加入反應體系中,這樣可以有效提高實驗的重復性。

    g 反應體系:建議以大體系進行實驗,如20 μL或50 μL。

     

    標準擴增程序

     

     

    反應階段

    溫度

    時間

    循環數

    1

    逆轉錄

     50℃a

     15 minb

    1

    2

    預變性

    95℃

    30 sec

    1

    3

    擴增反應

    95℃

    10 sec

    45 cycles

    60℃

    30 secc

    【注】:

    a 對于含復雜二級結構或高GC含量的RNA模板,可將逆轉錄溫度提高到55℃,有助于提升擴增效率和靈敏度。

    b 逆轉錄時間可以根據模板的復雜程度進行調整,時間為5min時可滿足大多數基因的鑒定。

    c 不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同,請根據最短時間限制進行設置。

    HB220304

    400-6111-883

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