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    Hieff? miRNA Universal?qPCR SYBR Master Mix(加A法)

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷(元)

    Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix(加A法)

    11171ES03

    1 mL

    685.00

    650.00

    11171ES08

    5×1 mL

    2,895.00

    2600.00

     

    產品描述

     
    microRNA是一類被廣泛關注的非編碼RNA,長度為22 nt左右,對植物和動物的基因表達有著非常重要的調控作用。本試劑盒采用SYBR® Green I嵌合熒光法的原理進行miRNA熒光定量檢測。本產品中的Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix是專門為miRNA定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量PCR檢測試劑,含有特殊的ROX Passive Reference Dye,適用于所有qPCR儀器,無需在不同的儀器上調整ROX的濃度,只需在配制反應體系時加入引物和模板即可進行擴增。DNA Polymerase采用化學修飾的熱啟動聚合酶,配合特殊的Buffer體系,使反應特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內進行準確定量。
    本產品推薦與本公司的Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(加A法)(Cat#11148ES)配套使用,以獲得最優的實驗結果。

     

    產品組分

     

    組分編號

    組分名稱

    產品規格

    11171ES03

    (20 μL×100 rxn)

    11171ES08

    (20 μL×500 rxn)

    11171-A

    2×Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

    1 mL

    5×1 mL

    11171-B

    RNase-free H2O

    2×1 mL

    5×1 mL

     

    運輸與保存方式

     

    冰袋運輸。-20避光保存,有效期1年。

     

    需自備的試劑及耗材

     

    1)無核酸酶污染的槍頭及離心管。

    2PCR上游引物(Forward Primer)。

    Forward Primer設計原則

    通常以成熟的miRNA序列為基礎,將U替換成T。Tm值建議在65℃左右??蛇m當在引物的5’端添加若干個GC堿基以增加Tm值,也可適當在5’3’端去掉若干堿基以減少Tm值,注意避免引入二級結構。

     

    注意事項

     

    1)使用前,將凍存的各組分充分融解并輕輕混勻后使用。

    2)實驗時,請盡量使用無污染的耗材,避免污染。

    3)本產品避免反復凍融,配制時應避免強光照射。

    4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    5)本產品僅作科研用途!

     

    操作步驟

     

    一、體系配制

    1)將試劑放置室溫下融化,使用前上下顛倒,輕輕混勻,并輕微離心后使用,避免起泡。

    2)將試劑置于冰上,按照下表配制試劑。RNase-free H2O可替換為其他用于分子生物學實驗的無核酸酶水。

    】:沒有混勻試劑、使用振蕩器混勻、未在冰上配置試劑等會導致反應性能下降。

    3)熒光定量PCR體系配制

    組分

    體積 (μL)

    體積 (μL)

    終濃度

    2×Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix

    10 μL

    25 μL

    1 ×

    Forward Primer(自備)

    X

    X

    400 nM

    Reverse Primer (10 μM)

    0.8 μL

    2 μL

    400 nM

    cDNA

    X

    X

    -

    RNase-free H2O

    Up to 20 μL

    Up to 50 μL

    -

    】:miRNA第一鏈cDNA的加入量不要超過qRT-PCR體積的1/10。高濃度cDNA易導致非特異擴增,可對cDNA適當稀釋10-1000倍。

    二、PCR反應程序設置

    可參考以下兩個程序進行定量PCR反應。

    a. 熒光定量PCR常規擴增程序(兩步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    10 min

    1

    變性

    95℃

    15 sec

    35-40

    退火/延伸

    60℃

    20 sec

    熔解曲線階段                儀器默認設置                                         1

    b. 熒光定量PCR快速擴增程序(兩步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    10 sec

    1

    變性

    95℃

    5 sec

    40

    退火/延伸

    60℃

    20 sec

    熔解曲線階段                

    儀器默認設置

    1

    】:

    1退火/延伸溫度和時間可根據實驗要求適當調整。

    2)常規程序與快速程序根據實驗儀器選擇,例如:ABI QuantStudio 5等儀器可以進行快速程序設置,Bio-Rad CFX96等儀器不可設置快速程序,需要進行常規程序設置。

     

    HB220923

     

    400-6111-883

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