<ruby id="zbzzx"><b id="zbzzx"></b></ruby>
<pre id="zbzzx"><ruby id="zbzzx"><mark id="zbzzx"></mark></ruby></pre>

    Hieff? Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit

    更多活動更多優惠,盡在翌圣商城》

    批量采購, 請點擊詢價

    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格

    促銷價

    Hieff? Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit

    11172ES40

    40 rxns

    2075.00

    1745.00

    11172ES60

    100 rxns

    4345.00

    3655.00

     

    產品描述

     

    Hieff? Fast Cell Direct SYBR Green RT-qPCR Kit 適用于對各種動物細胞進行RNA提?。ㄈ?/span>cell line 化的貼壁細胞和懸浮細胞、原代培養細胞、各種干細胞、iPS 細胞等),無需提RNA,可直接進行qPCR表達分析,用時短,操作簡單,出錯率低,最短只需1.5小時就可高效完成從模板制備到反轉錄反應及基因表達分析等步驟。

    試劑盒中包含反轉錄以及熒光檢測試劑,無需另外購買,可輕松地進行基因表達分析。

     

    產品組分

     

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    11172ES40 (40 rxns)

    11172ES60 (100 rxns)

    11172-A

    FCD Lysis Buffer

    2 mL

    5 mL

    11172-B

    FCD Washing Buffer

    8 mL

    20 mL

    11172-C

    FCD Stop Solution

    100 μL

    250 μL

    11172-D

    DNase I

    80 μL

    200 μL

    11172-E

    4× Hieff? FCD RT Mix

    200 μL

    500 μL

    11172-F

    2× Hieff? FCD qPCR SYBR Master Mix

    2 mL

    5 mL

    11172-G

    RNase Free H2O

    2 mL

    5 mL

     

    運輸與保存方式

     

    FCD Lysis Buffer FCD Washing Buffer融解后置于4℃保存,注意防止污染。FCD Stop Solution、DNase I、4×Hieff? FCD RT Mix2×Hieff? FCD qPCR SYBR Master Mix長期保存時請于-20℃放置。有效期6個月。

     

    需自備的試劑及耗材

     

    無核酸酶污染的槍頭及離心管。

     

    注意事項:

     

    1)使用前,將凍存的各組分充分融解并輕輕混勻后使用。

    2)實驗時,請盡量使用無污染的耗材,避免污染。

    3)本產品避免反復凍融,配制時應避免強光照射。

    4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    5)本產品僅作科研用途!

     

    操作步驟

     

    一、裂解產物的制備

    1. 將試劑放置于室溫下融化,使用前上下顛倒,輕輕混勻,并輕微離心后使用,避免產生氣泡。

    】:沒有完全混勻試劑、未在冰上配置試劑等會導致反應性能下降。

    2. 根據細胞類型,將細胞轉移至離心管中,5000 rpm離心2 min收集細胞,充分吸除培養基。若細胞在96孔板中培養,可直接吸除培養基。

    3. 各個孔內加入FCD Washing Buffer 150 μL,吸打清洗細胞,5000 rpm離心2 min,吸盡FCD Washing Buffer。

    4. 各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液,2 μL DNase Ⅰ溶液,室溫吸打混勻后靜置5分鐘,孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution, 吸打混勻 5 次左右,即可得到裂解產物。

    】:a) 細胞數的基本要求是每孔 1 × 104 cells, 該試劑盒可以使用的范圍是 1 × 103 - 1 × 106 cells。若細胞數量較多,可適當等比例增加FCD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量。

    b) 50 μL的裂解液對應加入2.5 μLFCD Stop Solution。依實驗需要,加入裂解液量增大時需相應增大FCD Stop Solution的量。

    c) 不同細胞的離心條件不同,請使用適合于所用細胞的離心速度進行離心。

    d) 細胞裂解產物溶液長期保存時,請置于-20℃。

    5. 室溫融化4× Hieff? FCD RT Mix后輕微顛倒混勻,置于冰上并按下表配置反應體系:

    組分

    體積 μL

    終濃度

    4× Hieff? FCD RT Mix

    5

    1 ×

    裂解產物*

    x

    x

    RNase-free H2O

    Up to 20

    -

    *推薦使用量為2-5 μL,盡量不超過45%。


    二、反轉錄

    移液器輕輕混勻上述配制的反應液,按下表程序進行反轉錄反應:

    反應溫度

    反應時間

    55℃

    85℃

    15 min

    5 min

    】:反轉錄溫度推薦使用55℃,對于高GC含量模板或者復雜模板,可將反轉錄溫度提高到 60℃。反轉錄產物可直接進行下游RT-qPCR檢測。為避免反轉錄體系對qPCR反應的抑制,得到合適的Ct值(10-35),可將產物稀釋10-1000倍后使用。若短時間內不進行下游實驗,可放置于-20℃保存。

    三、熒光定量PCR

    a. 體系配置

    推薦使用下列組份比例配制反應液(配制過程請于冰上進行):

    組分

    體積(μL

    終濃度

    2× Hieff? FCD qPCR SYBR Master Mix

    10

    1 ×

    Forward Primer (10 μM)

    0.4

    200 nM

    Reverse Primer (10 μM)

    0.4

    200 nM

    反轉錄產物

    X

    -

    RNase-free H2O

    Up to 20

    -

    】:若反轉錄產物未進行稀釋,反轉錄產物的加入量不要超過RT-qPCR體積的1/10,高濃度模板易導致非特異擴增。若反轉錄產物適當稀釋5-50倍,模板推薦用量4 μL,盡量不要超過6 μL。反應性能較差時,可以在0.2-1.0 μM范圍內調整引物濃度。
    建議采用下面的 Shuttle PCR 標準操作流程進行 PCR 反應。必要時進行 PCR 反應條件的優化。使用Tm值較低的引物等進行Shuttle PCR難以擴增時,進行三步法 PCR 擴增反應。

    b. 熒光定量PCR擴增程序(兩步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    30 sec

    1

    變性

    95℃

    10 sec

    35-40

    退火/延伸

    60℃

    30 sec

    熔解曲線階段                儀器默認設置                                         1

    實驗條件允許時,也可使用快速程序進行擴增。

    c. 熒光定量PCR快速擴增程序(兩步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    10 sec

    1

    變性

    95℃

    5 sec

    40

    退火/延伸

    60℃

    10 sec

    熔解曲線階段                

    儀器默認設置

    1

    】:退火/延伸溫度、終延伸時間可根據實驗要求適當調整。 快速程序適用于絕大多數基因,個別復雜二級結構基因可嘗試標準程序。

    d. 熒光定量PCR擴增程序(三步法)

    循環步驟

    溫度

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    30 s

    1

    變性

    95℃

    10 sec

    40

    退火

    55-60℃

    20 sec

    延伸

    72℃

    20 sec

    熔解曲線階段                

    儀器默認設置

    1

     

    HB220926


    400-6111-883

    亚洲国产欧美日本精品,网站免费观看国产精品,国产午夜精品久久精品电影_观看