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    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息
     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

    20201ES76

    500T

    288.00

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

    20201ES86

    2500T

    818.00

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒(增強型)

    20201ES90

    5000T

    1518.00


    產品描述
     

    BCABicinchoninic acid)法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法?;陔p縮脲反應,即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+,產生一種紫藍色復合物,在562nm處有高的吸光值,該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。

    BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測,也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量(100μL)的蛋白樣品,但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20(v/v),從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便,僅需少量(10-25μL)的蛋白樣品。不過,由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8(v/v),某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低最低檢測水平。我司提供三種規格的BCA蛋白濃度檢測試劑盒,比色皿法分別可做50次,250次,500次。酶標法分別可做500次,2500次,以及5000次。


    產品特點
     

    1)靈敏度高,最小檢測蛋白量可達0.2μg,檢測濃度下限達到10μg/mL。

    2)速度快,比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。

    3)線性范圍廣,20-2000μg/mL濃度范圍內有較好的線性范圍。

    4)不受大部分樣品中的化學物質的影響,詳情見附表1。


    產品組分
     

    編號

    組分

    產品編號/規格

    儲存

    20201ES76(500T)

    20201ES86(2500T)

    20201ES90(5000T)

    20201-A

    BCA試劑A

    100mL

    500mL

    2×500mL

    4℃

    20201-B

    BCA試劑B

    3mL

    15mL

    2×15mL

    4℃

    20201-C

    蛋白標準品(BSA)

    5×1mL(2mg/mL)

    10×1mL(2mg/mL)

    10×2mL(2mg/mL)

    4℃


    運輸與保存方法
     

    冰袋運輸。試劑盒中的A、B液室溫4℃保存;蛋白標準品(BSA)長時間不用,可置于-20℃保存,有效期12個月。


    注意事項
     

    1)使用BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,因此需注意保持定時和定溫,以確保精確定量。

    2)低溫或長期保存,若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37ºC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染,則應丟棄,避免對實驗結果造成影響。

    3)實驗操作規范,提高上樣量的精確度。

    4)每次測定都需做相應的標準曲線,因為顯色反應與溫度和時間的變化有關,精準的蛋白定量宜每次都做標準曲線。

    5)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
    6)本產品僅作科研用途!


    操作方法
     

    一、配制標準品和工作液
     

    1. 配制BSA標準品體系

    標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。BSA標準品體系配制可參考表1和表2。

    1 BSA標準品體系配制(比色皿檢測,線性范圍20-2000μg/mL)*

    Vial

    稀釋液體積(μL)

    2mg/mL BSA體積(μL)

    BSA終濃度(μg/mL)

    A

    0

    100

    2000

    B

    25

    75

    1500

    C

    50

    50

    1000

    D

    125

    75

    750

    E

    150

    50

    500

    F

    350

    50

    250

    G

    375

    25

    125

    H

    395

    5

    25

    I

    400

    0

    0=Blank

    *如用比色皿檢測,每管需加100μL標準品,按3個重復計算,每個濃度至少需配制300μL。

    2 BSA標準品體系配制(微孔板檢測,線性范圍20-2000μg/mL)*

    Vial

    稀釋液體積(μL)

    2mg/mL BSA體積(μL)

    BSA終濃度(μg/mL)

    A

    0

    30

    2000

    B

    9

    21

    1400

    C

    12

    18

    1200

    D

    15

    15

    1000

    E

    21

    9

    600

    F

    24

    6

    400

    G

    27

    3

    200

    H

    49

    1

    40

    I

    30

    0

    0=Blank

    2. 配制BCA工作液

    1)計算所需要的BCA工作液體積。

    BCA工作液體積=(標準品+待測樣品)×重復數×每個樣品所需要的BCA工作液

    【注】:比色皿檢測時每個樣品加2.0mL BCA工作液,微孔板檢測每個樣品加200μL BCA工作液。

    2)配制BCA工作液:50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑BA:B=50:1),充分混勻。

    【注】BCA試劑B加入BCA試劑A中后,迅速渾濁,通過混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內,室溫條件24h穩定。


    二、檢測方法
     

    1. 比色皿檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)

    1)各取100μL標準品和待測樣品加入到反應管中。

    2)每管加入2.0mL BCA工作液,混勻。37℃孵育30min。

    【注】:也可室溫孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA檢測蛋白濃度,延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限,以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低,可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。

    3)冷卻到室溫。分光光度計檢測,設定波長為562nm。用裝滿水的比色皿對儀器校零。在10分鐘內對所有樣品讀數。

    【注】:由于BCA反應達不到真正的反應終點,即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續。但是,由于室溫下生色比率相當低,因此若是10min內能對所有的樣本進行562nm吸光度的測試,不會導致明顯錯誤。

    4)根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/mL;Y-最終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

    2. 微孔板檢測方法(樣品:BCA工作液=1:8)

    1)各取25μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。

    【注】:樣品與工作液比例為1:8,若樣品有限,可使用10μL標準品和待檢測樣品進行檢測(即1:20),這時試劑盒的檢測范圍為125-2000μg/mL。

    2)每孔加入200μl BCA工作液,振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板,37℃孵育30min。

    3)冷卻到室溫,在酶標儀上的540-595nm波長范圍處檢測吸光度,其中562nm波長為最佳。

    【注】:a)由于酶標板的光徑比比色皿短,使得酶標板檢測需要更好的樣品:BCA工作比率來獲得相同的檢測靈敏度。若使用高于562nm的檢測波長,建議延長孵育時間到2h。b)延長孵育時間或者提高樣品:BCA工作比會增高每個孔的OD562nm凈值,并且降低檢測下限和工作線性范圍。

    4)根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度ug/mL;Y-最終的OD562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

    附表:BCA蛋白濃度測定的兼容性

    名稱

    耐受濃度

    Sodium bicarbonate   

    100mM

    Sodium phosphate     

    25mM

    2-Mercaptoethanol  

    0.01%

    Glycercol (pure)  

    10%

    Glycine-HCl, pH2.8  

    100mM

    HEPES  

    100mM

    Hydrochloric acid  

    100mM

    Leupeptin

    10mg/L

    Nickel chloride (in TBS, pH8.0)

    10mM

    Nonidet P-40 (NP-40)  

    5%(w/v)

    Octyl β -glucoside

    5%(w/v)

    Potassium thiocyanate

    3.0M

    SDS   

    5%

    Sodium acetate, pH4.8   

    200mM

    Sodium azide

    0.20%

    Sodium hydroxide   

    100mM

    Sucrose   

    40%

    Triton X-100   

    5%

    Triton X-114, X-305,X-405

    1%

    Tween-20, Tween-60, Tween-80

    5%

    Zwittergent

    1%

    ACES, pH7.8  

    25mM

    Acetone   

    10%

    Acetonitrile    

    10%

    Ammonium sulfate   

    1.5mM

    Aprotinin

    10mg/L

    Bicine, pH8.4   

    20Mm

    Bis-Tris, pH6.5    

    33mM

    Borate, pH8.5    

    50mM

    Brij-35

    5%

    Brij-52

    1%

    Brij-56, Brij-58

    1%

    BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584)

    nointerference(undiluted)

    Calcium chloride (in TBS, pH8.0)

    10mM

    CelLytic B Reagent

    nointerference(undiluted)

    Cesium bicarbonate

    100mM

    CHAPS   

    5%

    Cobalt chloride (in TBS, pH8.0)  

    0.8mM

    CytoBuster Protein Extraction Reagent (Cat. No. 71009)

    nointerference(undiluted)

    Deoxycholic acid

    5%

    Dithioerythritol (DTE)   

    1mM

    Dithiothreitol (DTT)   

    1mM

    DMF   

    10%

    DMSO  

    10%

    EDTA   

    10mM

    EPPS, pH8.0   

    100mM

    Ethanol   

    10%

    Ferric chloride (in TBS, pH8.0)

    10mM

    Glucose   

    10mM

    Glycerol

    10%

    Guanidine-HCl

    4M

    Imidazole, pH7.0   

    50mM

    MES, PH6.1

    100mM

    Methanol

    10%

    MOPS, pH7.2

    100mM

    N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2

    10mM

    Octyl β-thioglucpyranoside

    5%

    PIPES, pH6.8

    100mM

    PMSF  

    1mM

    PopCulture Reagent (Cat. No. 71092)  

    nointerference(undiluted)

    Reportasol Extraction Buffer (Cat. No. 70909)  

    nointerference(undiluted)

    Sodium chloride

    1M

    Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4  

    200mM

    Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2

    1mM

    Span 20

    1%

    TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0)

    nointerference(undiluted)

    Thimerosal

    0.01%

    TLCK

    0.1mg/L

    TPCK

    0.1mg/L

    Tricine, pH8.0  

    25mM

    Triethanolamine, pH7.8  

    25mM

    Tris

    250mM

    Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP)

    1mM

    Urea

    3M

    Zinc chloride (in TBS, pH8.0)

    10mM

    HB200224

    400-6111-883

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