<ruby id="zbzzx"><b id="zbzzx"></b></ruby>
<pre id="zbzzx"><ruby id="zbzzx"><mark id="zbzzx"></mark></ruby></pre>

    E.coli宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒(2G)

    更多活動更多優惠,盡在翌圣商城》

    批量采購, 請點擊詢價

    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G)

    E.coli宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒(2G)

    41308ES50

    50T

    8,895.00

    41308ES60

    100T

    16,425.00

     

    產品描述

     

    E.coli宿主細胞DNA殘留檢測試劑盒是用于定量分析檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中的E.coli殘留DNA含量的試劑盒。

    本試劑盒采用探針法熒光定量PCR原理,專一快速的檢測E.coli細胞的殘留DNA,其最低檢測限可以達到fg水平。試劑盒需本公司的磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒(Cat#18461ES/18462ES)配套使用。

     

    產品組分

     

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    41308ES50 (50T)

    41308ES60 (100T)

    41308-A

    E.coli qPCR Mix

    0.75 mL

    1.5 mL

    41308-B

    E.coli Primer&Probe Mix

    250 μL

    500 μL

    41308-C

    DNA Dilution Buffer

    2×2 mL

    4×2 mL

    41308-D

    E.coli DNA Control (30 ng/μL)

    25 μL

    50 μL

     

    運輸和保存方法

     

    1. 所有組分均干冰運輸,-20℃保存,有效期2年。

    2. 收到貨后,請檢查共4個組分是否齊全,并立即放入對應的保存溫度中儲存。

     

    注意事項

     

    1. 使用本試劑前請仔細閱讀本說明書,實驗應規范操作,包括樣本處理、反應體系的配制及加樣。

    2. 每個組分在使用前都應充分震蕩混勻,低速離心。

    3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

    4. 本產品僅作科研用途。

     

    適用機型

     

    包含但不限于以下儀器:

    Bio-RadCFX96 Optic Module;

    Thermo ScientificABI 7500,ABI Quant Studio 5,ABI Step OnePlus;

    上海宏石醫療科技:SLAN-96S。

     

    使用方法

     

    一、E.coli DNA定量參考品的稀釋和標準曲線的制備

    用試劑盒中提供的DNA稀釋液DNA定量參考品進行梯度稀釋,稀釋濃度依次為300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL。

    具體操作如下:

    1. 試劑盒中的DNA定量參考品DNA稀釋液置于冰上融化,待完全融化后,輕微振蕩混勻,低速離心10 sec。

    2. 6凈的1.5 mL離心管,分別標記為Std0,Std1,Std2,Std3,Std4,Std5。

    3. 在標記為Std01.5 mL離心管中加90 μL DNA Dilution Buffer10 μL E.coli DNA Control (30 ng/μL),即稀釋3 ng/μL,振蕩混勻后短時間快速離心10 sec,該濃度可分裝置于-80℃期保存(不超過3個月),使用時避免反復凍融。

    4. Std1,Std2,Std3,Std4,Std5管中先分別加入90 μL DNA稀釋液,再進行梯度稀釋,稀釋方法如下:

    稀釋管

    稀釋比例

    終濃度

    Std1

    10 μL Std0 + 90 μL DNA Dilution Buffer

    300 pg/μL

    Std2

    10 μL Std1 + 90 μL DNA Dilution Buffer

    30 pg/μL

    Std3

    10 μL Std2 + 90 μL DNA Dilution Buffer

    3 pg/μL

    Std4

    10 μL Std3 + 90 μL DNA Dilution Buffer

    300 fg/μL

    Std5

    10 μL Std4 + 90 μL DNA Dilution Buffer

    30 fg/μL

    【注】

    1. 每個濃度做3個復孔,該試劑可測試30 fg/μL-300 pg/μL線性范圍。需要,可適當擴大縮小線性范圍。

    2. 為減少反復凍融次數和避免污染,建議初次使用時將DNA定量參考品分裝儲存于-80℃。

    3. 已融化未使用的DNA稀釋液可保存于2-8℃ 7天,長時間不用,請放置于-20℃。

    4. 為確保模板完全混勻,每個梯度稀釋時需輕微震蕩混勻1 min。

     

    二、樣本回收質控ERC的制備

    根據需要設ERC中的E.coli DNA標準品濃度(以制備加30 pg E.coli DNAERC為例),具體操作如下

    1. 100 μL待測樣本加入1.5 mL凈的離心管中,再加入10 μL Std3,混勻,標記為ERC。

    2. 回收ERC和同批待測樣本一起進行樣本前處理,制備回收ERC純化液。

     

    、陰性抽提質控NCS的制備

    根據實驗設置陰性抽提質控NCS,具體操作如下:

    1. 100 μL樣本基質溶液DNA稀釋液加入1.5 mL凈的離心管中,標記為NCS。

    2. 陰性質控NCS和同批待測樣本一起進行樣本前處理,制備成陰性質控NCS純化液。

     

    、無模板對照NTC的制備

    根據實驗設置無模板對照NTC,具體操作如下:

    1. 無模板對照NTC無需進行樣本前處理,qPCR法檢測殘留DNA含量階段開始配置即可。

    2. 每管或孔中的NTC樣本為20 μL Mix混合液(即15 μL E.coli qPCR Mix + 5μL E.coli Primer&Probe Mix+ 10 μL DNA Dilution Buffer,建議配置3個重復孔的量。

     

    、反應體系

    組分

    體積(μL

    E.coli qPCR Mix

    15

    E.coli Primer&Probe Mix

    5

    DNA template

    10

    總體積

    30

    【注】

    1. 根據反應孔數計算本次所需的Mix混合液總量:Mix混合液=(反應孔數+2× (15+5) μL(含有2孔的損失量)。通常,每個樣本做3個重復孔。

    2. 反應孔數=5個濃度梯度的標準曲線+1個無模板對照NTC+1個陰性抽提質控NCS+待測樣TS個數+待測樣本對應加標回收ERC個數)× 3。

    NTC (No Template Control)DNA Dilution Buffer

    NCS (Negative Control Solution)樣本基質溶液或DNA Dilution Buffer進行樣本前處理,所得純化液為NCS

    TS (Test Sample)待測樣本

    ERC (Extraction Recovery Control)待測樣本中加入如30 pg標準品DNA后進行樣本前處理,所得純化液為加標回收ERC

    3. 加樣完成密封好管子后,請低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,再震蕩混勻5 sec以上,完全混勻反應液,再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,如有氣泡,需將氣泡排盡。

    下圖為參考板位:

    image.png

    該示例是對E.coli殘留DNA qPCR法檢測操作的展示,檢測樣本包括:5個濃度梯度的E.coli DNA標準曲線、1個無模板對照NTC、1個陰性質控NCS、3個待測樣本TS、3樣本回收ERC。建議每個樣本3個重復孔。

     

    、擴增程序參數設置(兩步法)(以ABI公司7500 qPCR儀、軟件版本2.0為例)

    1. 創建空白新程序,選擇絕對定量檢測模板。

    2. 創建1個檢測探針,命名為E.coli-DNA,選擇報告熒光基團為FAM,猝滅熒光基團為none,參比熒光為ROX

    參比熒光可根據儀器型號等情況,選擇是否需要添加)。

    3. Assign target (s) to the selected wells面板中,將標準曲線孔的Task一欄設置為Standard,并且在Quantity一欄分別賦值為300000、30000、3000、300、30(含義為每孔的DNA濃度,單位為fg/μL),并且在相應的sample name一欄中命名為300 pg/μL、30 pg/μL、3 pg/μL、300 fg/μL、30 fg/μL;將無模板對照NTC孔的Task一欄設置為NTC;將陰性質控NCS孔、待測樣本TS孔、樣本加標回收ERC孔的Task一欄設置為Unknown,并且在相應的Sample Name一欄中分別命名為NCS、TS、ERC,之后點擊Start Run,開始儀器運行。

    4. 擴增程序設置:設置反應體積30 μL。

    循環步驟

    溫度(

    時間

    循環數

    預變性

    95℃

    10 min

    1

    變性

    95℃

    15 sec

    40

    退火/延伸(收集熒光)

    60℃

    30 sec

     

    、qPCR 結果分析

    1. AnalysisAmplification Plot面板中,系統會自動給出Threshold,有時系統給出的Threshold離基線太近,導致復孔之間Ct相差甚遠,可手動調節Threshold至合適位置,點擊Analyze。此時可在Multicomponent Plot初步查看擴增曲線的形態是否正常。

    2. AnalysisStandard Curve面板中,可讀取標準曲線的、擴增效率(Eff%、斜率(Slope)、截距(Intercept。正常的標曲0.99,擴增效率在90%≤Eff%≤110%范圍內,Slope-3.6~-3.1。

    3. AnalysisView well table面板中,Quantity一欄可讀取無模板對照NTC、陰性質控NCS、待測樣本TS、樣本加標回收ERC的檢測值,單位為fg/μL,后續可在檢測報告中將單位換算成pg/μLpg/mL。

    4. 結果分析的參數設置需依據具體的機型及使用的軟件版本,一般也可由儀器自動判讀。

    5. 根據待測樣本TS和樣本加標回收ERC的檢測結果計算加回收率,加回收率要求在50%150%之間。加標回收率計算公式:回收率(%) = {本加標測定值(fg/µL)-測定值(fg/µL)} x洗脫體積(µL) / DNA加入量理論值x 100%。

    6. 陰性質控NCSCt值應大于標曲最低濃度Ct均值。

    7. 無模板對照NTC的檢測結果應為UndeterminedCt≥35。

    HB220915

    400-6111-883

    亚洲国产欧美日本精品,网站免费观看国产精品,国产午夜精品久久精品电影_观看