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    Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白濃度測定試劑盒

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    產品說明書

    FAQ

    COA

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    產品信息

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    價格(元)

    Bradford Protein Quantification Kit

    Bradford蛋白濃度測定試劑盒

    20202ES76

    500T

    4℃

    98.00

    20202ES86

    2500T

    4℃

    398.00


    品描述

    Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據Bradford染液(考馬斯亮藍G-250染料)與蛋白結合,使染料的最大吸收峰從A456變為A595,且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關系的原理設計的。本法通過吸光值,推算蛋白濃度,實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高,比Lowry法大約高四倍,最低蛋白檢測量可達1μg。測定速度快、簡單,僅需一種試劑即可,且不受大多數樣品中化學試劑的影響。

    我司提供二種規格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒,比色皿法分別可做125次和625次。酶標法分別可做500次和2500次。


    產品組分

    編號

    組分

    產品編號/規格

    20202ES76   (500T)

    20202ES86   (2500T)

    20202-A

    Bradford蛋白染色液

    125mL

    5×125 mL

    20202-B

    蛋白標準品(BSA)

    5×1mL(2mg/mL)

    5×2mL(2mg/mL)


    運輸與保存方法

    冰袋運輸。

    染色液4℃保存,蛋白標準品常溫或4℃保存,有效期一年。


    注意事項

    1)Bradford染色液使用前,應充分混勻。同時,酶標儀需預熱20min。

    2)Bradford染色液需恢復到室溫再使用,有利于提高檢測的靈敏度。另,使用前需顛倒幾次以充分混勻。

    3)由于Bradford染液的顏色反應并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關系,因此每次試驗都必須建立標準曲線。另外,為了得到更精確的結果,每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。

    4)Bradford法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好,比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品,建議使用BCA增強型蛋白定量檢測試劑盒【貨號:20201ES76】。

    5)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
    6)本產品僅作科研用途!


    操作方法

    一、配制標準品

    1. 配制BSA標準品體系

    注:標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。

    BSA標準品體系配制可參考表一。

    表一BSA標準品體系配制(微孔板檢測,線性范圍100-1500μg/mL)

    Vial

    稀釋液體積(μL)

    2mg/mL BSA體積(μL)

    BSA終濃度(μg/mL)

    A

    0

    100

    2000

    B

    25

    75

    1500

    C

    50

    50

    1000

    D

    125

    75

    750

    E

    150

    50

    500

    F

    350

    50

    250

    G

    375

    25

    125

    H

    395

    5

    25

    I

    400

    0

    0=Blank


    二、檢測方法

    A. 標準比色皿檢測(線性范圍:100-1500μg/mL)

    1. 各取20μL不同濃度標準品和待測樣品加入到反應管中;

    2. 加入1mL Bradford染色液,混勻。室溫孵育10min?!咀ⅰ浚簶颖臼覝胤跤龝r間不可超過1h;

    3. 分光光度計上測定595nm處的吸光度,用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。

    4. 根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD595nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

    B. 標準微孔板檢測(線性范圍:100-1500μg/ml)

    1. 各取L各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中;

    2. 每孔加入250μL Bradford染色液,振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板,室溫孵育10min?!咀ⅰ浚簶颖臼覝胤跤龝r間不可超過1h;

    3. 酶標儀上測定595nm處的吸光度?;蛘咂渌?75-615nm波長范圍內的吸光度,但是相對于595nm,吸光度會存在0-10%的損失。

    4. 根據BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD595nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

    注:a)由于酶標板的光徑比比色皿短,經酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得,因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm,可使用7-10μL標準品/待檢樣本,和250μL Bradford染色液來進行檢測。b)如果使用與酶標儀相關的曲線擬合算法(curve fitting algorithm),那么四參數或者最佳擬合曲線可能得到更為精確的結果,并不是單純的線性擬合。若是手動標記各點濃度,點-點曲線出來的結果精確于線性擬合。若對結果準確性的要求不是非常嚴格,可使用線性擬合分析數據。


    附錄        
                                                                           
                 表:Brandford蛋白濃度測定的兼容性

    名稱(鹽/緩沖液)

    耐受濃度

    ACES, pH 7.8

    100mM

    Ammonium sulfate

    1M

    Asparagine

    10mM

    Bicine, pH 8.4

    100mM

    Bis-Tris, pH 6.5

    100mM

    Borate (50mM), pH 8.5

    undiluted

    Calcium chloride in TBS, pH 7.2

    10mM

    Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4

    undiluted

    Cesium bicarbonate

    100mM

    CHES, pH 9.0

    100mM

    Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0

    undiluted

    Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5

    undiluted

    Cobalt chloride in TBS, pH 7.2

    10mM

    EPPS, pH 8.0

    100mM

    Ferric chloride in TBS, pH 7.2

    10mM

    Glycine

    100mM

    Guanidine?HCl

    3.5M

    HEPES, pH 7.5

    100mM

    Imidazole, pH 7.0

    200mM

    MES, pH 6.1

    100mM

    MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7

    undiluted

    MOPS, pH 7.2

    100mM

    Nickel chloride in TBS, pH 7.2

    10mM

    PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2

    undiluted

    PIPES, pH 6.8

    100mM

    RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5%   DOC,

    1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0

    1/10 dilution*

    Sodium acetate, pH 4.8

    180mM

    Sodium azide

    0.5%

    Sodium bicarbonate

    100mM

    Sodium chloride

    5.0M

    Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4

    200mM

    Sodium phosphate

    100mM

    Tricine, pH 8.0

    100mM

    Triethanolamine, pH 7.8

    100mM

    Tris

    2M

    TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6

    undiluted

    Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0

    undiluted

    Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH   8.3

    1/2 dilution*

    Zinc chloride in TBS, pH 7.2

    10mM


    名稱(變性劑)

    耐受濃度

    還原劑以及巰基試劑

    耐受濃度

    Brij?-35

    0.125%

    Dithiothreitol (DTT)

    5mM

    Brij-56, Brij-58

    0.031%

    Glucose

    1M

    CHAPS, CHAPSO

    5.0%

    Melibiose

    100mM

    Deoxycholic acid

    0.05%

    2-Mercaptoethanol

    1M

    Lubrol? PX

    0.125%

    Potassium thiocyanate

    3M

    Octyl β-glucoside

    0.5%

    Thimerosal

    0.01%

    Nonidet P-40 (NP-40)

    0.5%

    Misc.   Reagents & Solvents

    耐受濃度

    Octyl β-thioglucopyranoside

    3.0%

    Acetone

    10%

    SDS

    0.125%

    Acetonitrile

    10%

    Span? 20

    0.5%

    Aprotinin

    10mg/L

    Triton? X-100, X-114

    0.125%

    DMF, DMSO

    10%

    Triton X-305, X-405

    0.5%

    Ethanol

    10%

    Tween?-20

    0.062%

    Glycerol (Fresh)

    10%

    Tween-60

    0.1%

    Hydrochloric Acid

    100mM

    Tween-80

    0.062%

    Leupeptin

    10mg/L

    Zwittergent? 3-14

    0.025%

    Methanol

    10%

    螯合劑

    耐受濃度

    Phenol Red

    0.5mg/mL

    EDTA

    100mM

    PMSF

    1mM

    EGTA

    2mM

    Sodium Hydroxide

    100mM

    Sodium citrate

    200mM

    Sucrose

    10%

    還原劑以及巰基試劑

    耐受濃度

    TLCK

    0.1mg/L

    N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2

    100mM

    TPCK

    0.1mg/L

    Ascorbic acid

    50mM

    Urea

    3M

    Cysteine

    10mM

    o-Vanadate (sodium salt), in PBS, pH 7.2

    1mM

    Dithioerythritol (DTE)

    1mM



    400-6111-883

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