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    MolPure? Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit (2G) 磁珠法殘留 DNA 樣本前處理試劑盒(瓶裝)(2G)

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格

    MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit (2G)

    磁珠法殘留DNA樣本前處理試劑盒瓶裝(2G)

    18464ES25

    18464ES60

    25T

    100T

    1,355

    4,795

     

    產品描述

     

    MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit適用于生物制品樣本中殘留DNA檢測的前處理。采用獨特的磁珠和精心優化的緩沖體系,可最大限度的分離純化樣本中的微量宿主細胞殘留DNA。

    該前處理試劑盒可與本公司的多種宿主細胞DNA殘留(qPCR法)檢測試劑盒配合使用,包括CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41301ES)、HEK293宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41302ES/41306ES)、Vero宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41303ES)E.coli殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41304ES/41308ES)、SV40LTA&E1A殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41310ES)和復制型慢病毒(RCL)檢測試劑盒(Cat#41311ES)。

     

    產品組分

     

    類別

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    18464ES25 (25T)

    18464ES60 (100T)

    Part I

    18464-A

    蛋白酶K20 mg/mL

    0.5 mL/×1

    1 mL/×2

    Part

    18464-B

    磁珠懸浮液

    0.5 mL/×1

    1 mL/×2

    18464-C

    裂解液

    2.5 mL/×1

    10 mL/×1

    18464-D

    結合液

    10 mL/×1

    40 mL/×1

    18464-E

    洗滌液A*

    8 mL/×1瓶(需加12 mL乙醇)

    32 mL/×1瓶(需加48 mL乙醇)

    18464-F

    洗滌液B*

    4 mL/×1瓶(需加16 mL乙醇)

    16 mL/×1瓶(需加64 mL乙醇)

    18464-G

    洗脫液

    2.5 mL/×1

    10 mL/×1

    Part Ⅲ

    18464-H

    糖原

    225 uL/×1

    900 uL/×1

    18464-I

    Poly A鉀鹽

    150 uL/×1

    600 uL/×1

     

    運輸和保存方法

     

    1.Part I組分冰袋運輸,4℃可保存1,長期保存于-20℃。

    2.Part II組分室溫運輸,室溫保存,有效期1。

    3.Part Ⅲ組分干冰運輸,-20℃保存1年。

    4. 收到貨后,請檢查Part I、Part IIPart Ⅲ3個組分是否齊全,并立即放入對應的保存溫度中儲存。

     

    注意事項

     

    1. 使用前請詳細閱讀使用說明書,嚴格按照使用說明書操作,樣本處理建議在超凈臺或生物安全柜中進行。

    2. 注意觀察常溫保存溶液是否有析出或渾濁(尤其冬季室溫為低溫環境時),可37℃水浴至溶液澄清,避免影響使用效果。

    3. 洗脫時可能存在磁珠殘留,吸取樣本時應盡量避免吸入磁珠。

    4. 處理樣本及加樣時,勤換槍頭,避免交叉污染。

    5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

    6. 本產品僅作科研用途。

     

    實驗前準備

     

    1. 自備設備:漩渦振蕩器、水浴鍋或金屬浴、離心機、磁性分離架、杭州奧盛Auto-Pure32A自動化核酸提取儀或其他品牌全自動化核酸提取儀。

    2. 自備耗材:10μL-1000μL不等的低吸附帶濾芯槍頭、1.5 mL低吸附離心管、PCR 8連管或96孔板及相應的管蓋或覆膜。

    3. 自備試劑:無水乙醇(分析純)、1×PBS緩沖液(pH 7.4,無Mg2+Ca2+)、超純水。

    【注】:推薦您購買本公司的超純水(Cat#10116ES)。

    4. 首次使用時,需在洗滌液A*和洗滌液B*瓶中加入標簽或說明書中注明體積的無水乙醇,充分混勻后使用,并做好標記。

    每次使用后將瓶蓋蓋緊,以保持瓶中的乙醇含量。

     

    一、手工提取操作方法

    1. 樣本處理

    1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的核酸含量的樣本,可用1×PBSpH 7.4,無Mg2+Ca2+)對樣本進行適當比例稀釋后提取對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性,使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍內,稀釋倍數通常不超過100倍)。

    1.2 待測樣本為干粉,可用超純水將樣本稀釋10~100 mg/mL后使用。

    1.3 待測樣本為復雜背景基質,可根據需要進行加標回收實驗,以確定合適的樣本稀釋倍數。

    2. 100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中,加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K,渦旋混勻10 sec后短暫離心。

    【注】:樣本蛋白濃度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量為10 μL;樣本蛋白濃度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量為20 μL。

    3. 將離心管置于60℃孵育30 min,75℃孵育15min。

    【注】:若金屬浴升溫較快,可在同一個金屬浴上孵育;若升溫慢,則需提前準備2個金屬浴,并將溫度分別調至60℃75。

    4. 孵育完成后,加入400 μL結合液、9 μL糖原和6 μL Poly A鉀鹽渦旋混勻。

    5. 加入20 μL磁珠懸浮液,渦旋混勻后,放置10 min,每隔2 min渦旋混勻10 sec。

    【注】:磁珠使用前需渦旋混勻,保證磁珠徹底重懸。在一次性加樣4~5次后,建議再次混勻后再行加樣。

    6. 短暫離心后,將離心管置于磁力架上靜置1~2 min,待磁珠完全吸附,小心吸液體。

    7. 700 μL洗滌液A(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),渦旋混勻1 min,確保磁珠分散,離心管壁無聚集磁珠。

    8. 短暫離心后,將離心管置于磁力架上靜置1~2 min,待磁珠完全吸附,小心吸液體。

    9. 加入700 μL洗滌液B(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),渦旋混勻1 min,確保磁珠分散,離心管壁無聚集磁珠。

    10. 短暫離心后,將離心管置于磁力架上靜置1~2 min,待磁珠完全吸附,小心吸取體。

    11. 為保證盡量吸出殘留液體,可將離心管快速離心10 sec后,置于磁力架上用10 μL移液器吸出殘留液體。

    12. 打開管蓋,室溫37℃放置5~10 min,直至乙醇完全揮發,磁珠表面無反光至剛出現龜裂可,不可過度干燥。

    13. 將離心管從磁力架上取下,加入100 μL 65℃預熱的洗脫液,振蕩混勻短暫離心,65孵育5 min,期間振蕩混勻1次。

    14. 短暫離心后,將離心管放置于磁力架上靜置2 min,待磁珠完全吸附,小心將DNA溶液轉移至新的離心管中,保存于-20℃,長期保存需放置于-80℃。

     

    二、半自動化提取操作方法

    配套本公司自動化儀器使用,以32通道核酸提取儀為例。不同品牌和型號的儀器,試劑加入方式可能會有差別,詳情請咨詢本公司技術人員。

    1.樣本處理

    1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本,可用1×PBSpH 7.4,無Mg2+Ca2+對樣本進行適當比例稀釋后提取對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性,使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍內,稀釋倍數通常不超過100倍)。

    1.2 待測樣本為干粉,可用超純水將樣本稀釋10~100 mg/mL后使用。

    1.3 待測樣本為復雜背景基質,可根據需要進行加標回收實驗,以確定合適的樣本稀釋倍數。

    2. 100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中,加入100 μL裂解液10 μL蛋白酶K,渦旋混勻10 sec后短暫離心。

    【注】:樣本蛋白濃度0~100 mg/mL,蛋白酶K用量為10 μL;樣本蛋白濃度100~200 mg/mL,蛋白酶K用量為20 μL。

    3. 將離心管置于60℃孵育30 min,75℃孵育15 min,得到預處理樣本,待用。

    4. 按照下表向96孔深孔板中加入相應試劑

    位置

    試劑名稱

    用量/

    1/7

    預處理樣本

    200 µL

    結合液

    400 µL

    糖原

    9 µL

    Poly A鉀鹽

    6 µL

    2/8

    洗滌液A*

    700 µL

    3/9

    磁珠懸浮液

    20 µL

    洗滌液B*

    700 µL

    6/12

    洗脫液

    100 µL

    【注】:

    1. 磁珠懸浮液使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻,在一次性加樣4~5次后,建議再次混勻后再行加樣。
    2. 不同品牌和型號的儀器,試劑加入方式可能會有差別,詳情請咨詢本公司技術人員。

    5. 上述96板正確安放置核酸提取儀器中,并放置八聯磁棒套。

    6. 運行如下程序,程序結束后,將洗脫板轉移至新的離心管中,溶液可置于-20℃短期保存,-80℃長期保存。

    32通道核酸提取儀器的提取程序

    步驟

    孔位

    混合

    時間(min)

    吸磁

    時間(sec)

    等待

    時間(min)

    容積(μL)

    混合速度(1~10)

    溫度(℃)

    混合位置(0~100%)

    混合幅度(1~100%)

    吸磁位置(0~100%)

    吸磁速度(1~10)

    移磁珠

    3

    0.2

    40

    0

    700

    5

    /

    0

    80

    0

    1

    結合

    1

    12

    80

    0

    600

    5

    /

    0

    80

    0

    1

    清洗1

    2

    2

    30

    0

    700

    8

    /

    0

    80

    0

    1

    清洗2

    3

    1.5

    30

    4

    700

    8

    /

    0

    80

    0

    1

    洗脫

    6

    8

    80

    0

    100

    8

    65

    0

    80

    0

    1

    棄磁珠

    3

    0.2

    0

    0

    700

    5

    /

    0

    80

    0

    1

    【注】:

    1. 設置程序時,選項一欄中選擇9段磁吸升溫動作同步。
    2. 上述提取程序為推薦程序,用戶可根據儀器品牌型號及自身需求進行相應調整,詳情可咨詢本公司技術人員。

    HB221027

    400-6111-883

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