產品信息

產品描述

考馬斯亮藍（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結構上前者比后者多了2個甲基，命名上“G”為Green的縮寫，因G250的藍色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫，因R250的藍色染料呈微紅色調；“250”表示考馬斯亮藍的純度。生化實驗中常將考馬斯亮藍用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過與蛋白質內的氨基和羧基基團間的靜電結合作用以及范德華力，考馬斯亮藍與蛋白質形成強但非共價鍵連接的復合物。蛋白-染料復合物的形成穩定染料攜帶的負電荷陰離子（如磺酸基），從而產生在膜上或者膠上肉眼可見的藍色。

考馬斯亮藍R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達0.1 μg蛋白。R250染色后需要褪色，才能進行蛋白條帶的觀察。

考馬斯亮藍G250的檢測靈敏度雖然較低，但也可替代R250，使用一種快速而簡單的方法進行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0時，溶液無色；pH 7.0時溶液呈深藍黑色；若發生酸化，溶液呈現透明的棕褐色。當G250與蛋白結合，溶液又回到藍色，主要因為蛋白分子周圍具有更偏中性的pH環境。合適條件下，當把膠放在酸化的G250溶液中染色，顯示出藍色的蛋白條帶，背景呈淺琥珀色。此種方法條帶快速顯色，且背景顏色也很淺使得條帶看起來很清楚，則不需要做褪色處理。大部分蛋白用G250檢測的下限是0.5 μg。雖然靈敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色節省高達11 h。

產品性質

運輸與保存方法

室溫運輸和保存即可。

使用方法

1.標準染色步驟（考馬斯亮藍R250）

1） 蛋白電泳凝膠置于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平搖床上低速搖動30 min~過夜。

2）去除固定液，更換0.25%考馬斯亮藍R250染色液（0.25% R250溶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）完全覆蓋住膠，染色2-4 h。直至膠染成均勻的藍色。
注意：當膠在染色液內肉眼不可見時，說明染色完成，否則與深色的染色液對比，凝膠區域看起來顏色偏淺。

3）將膠重新放置在5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脫色4-24 h。約1-2 h后蛋白條帶即可看到，直至背景變透明后脫色才結束。中間可更換2-4次脫色液。

注意：此方法可檢測到的蛋白量最低達到0.1 μg蛋白/條帶。

4）將膠存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

2.快速染色步驟（考馬斯亮藍R250）

1）蛋白電泳凝膠在25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定30-60 min。

2）將膠放置在10%醋酸的水溶液中進行染色，含有60 μg/mL的考馬斯亮藍R250。約30 min后條帶顯示，讓膠繼續染色直至達到理想的蛋白條帶。在此染色方法中膠的背景染色比較淺，由于使用膠的濃度很低。

3）將膠重新放在10%醋酸溶液中脫色2 h或更長。期間可更換2-4次脫色液。

4）將膠存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

注意事項

1）0.25%考馬斯亮藍R250染色液配置的過程中，需要先用甲醇溶解R250粉末后，再加入醋酸和水，一般情況下不需要濾紙除雜。溶液可在4℃存放6個月，若長時間保存出現沉淀，可用濾紙過濾得到澄清液體。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3）本產品僅作科研用途！

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