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    Alkaline Phosphatase(30 U/μl),Calf Intestine(CIAP) 小牛腸堿性磷酸酶

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛腸堿性磷酸酶 

    10321ES80

    1000U

    936.00


    產品描述

    Alkaline Phosphatase,中文名堿性磷酸酶,可將DNA、RNA的5’端磷酸基團去除,常用于阻止載體的自連作用:在分子克隆實驗中,DNA連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在,載體在經酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。而載體經堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無磷酸基團,因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應中載體本身會優先發生的連接反應被阻止,提高了目的片段插入率。另外,堿性磷酸酶還可制備用于5’端標記的DNA模板,以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。

    本品為小牛腸來源的堿性磷酸酶,可以降解幾乎所有磷酸單酯,但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。


    產品組分

    組分編號

    組分名稱

    產品編號/規格

    10321ES80(1000 U)

    10321-A

    Alkaline Phosphatase (30 U/μL)

    1000 U

    10321-B

    10×AP buffer

    1 mL


    產品性質

    來源(Source)

    攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達質粒的酵母

    質量控制(Quality Control)

    無核酸外切酶、核酸內切酶、核糖核酸酶污染

    熱滅活(Thermal Inactivation)

    在螯合劑存在下,65℃加熱30 min,99%活性不可逆喪失;使用苯酚,可使酶完全失活。

    儲存液條件(Storage   conditions)

    10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM   ZnCl2,50% glycerol.

    活性定義(Unit definition)

    在pH9.8,37℃條件下,以對硝基苯酚磷酸鹽(p-nitrophenylphosphate)為底物,1分鐘生成1 μmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個活力單位。

    最佳pH(Optimal pH)

    該酶在底物濃度高的情況下其最佳反應pH為10,在底物濃度低時,最佳pH為8,此時該酶活性較高濃度底物時稍低。

    優化體系(Optimal Buffer)

    AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM   MgCl2)


    運輸和保存方法

    干冰運輸。-20℃保存,有效期18個月。


    注意事項

    1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
    2)本產品僅作科研用途!


    使用方法

    1 DNA去磷酸化

    ① 在1.5 mL離心管中加入下列試劑:

    組分

    體積

    無菌ddH2O

    Up to 50 μL

    DNA 片段*

    1-20 pmol

    Alkaline   Phosphatase

    1-2 μL

    10×AP buffer

    5 μL

    【*】單鏈DNA或含5’端突出末端的DNA推薦低溫下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建議在較高溫度下孵育。

    ② 混勻上述試劑,于37℃或50℃孵育30 min?;蛘?7℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min。


    2 酚氯仿法抽提DNA

    ① 苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提2次。

    【注】:推薦在酚提取前將其在含5 mM EDTA,0.5% SDS,50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以徹底滅活堿性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,滅活效果更佳。

    ② 氯仿/異戊醇(24:1)抽提。


    3 乙醇沉淀DNA

    ① 加入2.5 μL 3 M NaCl(終濃度150 mM)。

    ② 加入125 μL(2.5倍體積)預冷乙醇,混勻后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA。


    4 溶解DNA

    離心,徹底去除乙醇后,將DNA溶于適量去離子水(<20 μL)。


    相關產

    產品名稱

    貨號

    規格

    Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/μl) 蝦堿性磷酸酶

    10322ES72

    250 U

    Exonuclease I (E. coli) I型核酸外切酶

    10320ES81/93

    1500 U/15000 U


    HB210709

     

    400-6111-883

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