產品信息

 

產品名稱	產品編號	規格	價格（元）
rProtein A/G MagBeads (IP Grade) 蛋白A/G免疫磁珠	36417ES03	1mL	787.00
	36417ES08	5mL	2937.00

 

產品描述

 

Protein A/G免疫沉淀磁珠使用“納米表面生物技術”(S-TEC)，將Protein A/G高密度定向包被到超順磁性聚合物微球表面，具有更高的抗體結合能力和極低的蛋白非特異性吸附率，一步純化即可從血清樣品中分離出純度>90%的抗體，使用簡便有效。天然蛋白A（Protein A）是一種發現于金黃色葡萄球菌的細胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一種分離自G型或C型鏈球菌屬的細胞表面蛋白，二者功能相似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區相互作用，可結合大多數哺乳動物的IgG，但在兩者結合特異性上有所不同（詳見附錄）。Protein A/G免疫磁珠同時共價偶聯了蛋白A和蛋白G，比單獨的蛋白A或者蛋白G都有更廣的結合范圍，實用性更高。同時，本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時也去除了天然蛋白本身的非主要結合域以降低非特異性結合。本品適用的范圍廣泛，可應用于細胞裂解液、細胞分泌液上清、血清、動物腹水以及其它的免疫抗原等樣本。

 

產品性質

 

基質（Matrix spherical）	聚合物磁性微球
配體（Ligand）	重組Protein A/G
結合能力（Binding Capacity）	＞50µg hIgG /mg
粒徑 （Particle size）	1μm
磁珠濃度（Concentration）	10mg/mL
儲存緩沖液（Storage Buffer）	PBS，0.01% Tween-20, 0.02% NaN3
應用（Application）	rProtein Purification, Immunoprecipitation

 

運輸和保存方法

 

低溫運輸。4℃長期儲存，有效期2年。

 

注意事項

 

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。本產品僅作科研用途！

 

使用方法

 

工作液濃度應根據具體實驗確定，建議進行預實驗摸索最佳實驗濃度。

 

1. 緩沖液配制

平衡/結合/ 洗雜液:	0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
交聯液：	0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2
中和緩沖液：	1M Tris-HCl，pH 8.5
洗脫緩沖液： 終止液：	0.1M 甘氨酸，pH 3.0 50 mM Tris, pH 7.5

 

2. 抗原樣品制備

本操作說明書提供以下四種樣品處理方法，建議您根據不同來源的抗原樣品選擇適當的方式進行預處理，使待檢測抗原釋放至樣品溶液中。

血清樣品處理：若目標蛋白豐度較高， 建議用結合緩沖液稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為10-100µg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 500g, 10min），棄上清后稱重，按每毫克細胞50µL的比例用1×PBS洗滌2次；按每毫克細胞5-10µL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。

貼壁細胞樣品處理：移去培養基，按每 1.0×10⁵個細胞150µL的比例用1×PBS洗滌兩次；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內，按每 1.0×10⁵個細胞20-30µL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。

大腸桿菌樣品處理： 離心收集大腸桿菌（4℃, 12000g, 2min）， 棄上清后稱重， 按每克（濕重）菌體10mL的比例用1×PBS洗滌2次；按每克（濕重）菌體5-10mL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，重懸菌體，超聲裂解細胞，離心收集上清（4℃, 17000g, 10min）。

 

3. 磁珠預處理：將磁珠漩渦振蕩1min，使其充分混懸；取25-50µL（相當于50-100µg）磁珠懸液置于1.5mL EP管中。加入200µL結合緩沖液洗滌，進行磁性分離，吸棄上清，重復1次。加入200 µL結合緩沖液重懸磁珠備用。

 

4. 抗體吸附

1) 加入 100 μL平衡液將磁珠懸浮，加入目標抗體溶液，充分混勻。

2) 室溫孵育 10min，可以振蕩或漩渦混合均勻。

3) 將EP 管置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。如需要可留做進一步檢測。

4) 加入500μL 洗雜液混合均勻，置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。重復 洗雜至少 3次。

 

5. 抗體交聯 (備選)

1） 如果需要將抗體和目標抗原復合物共同洗脫，請忽略本步驟，直接進行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步驟操作，無需額外增加交聯液體積。

2）加入 1mL交聯液，振蕩懸浮，置于磁分離器上，大約1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。該操作重復兩次。

3）再加入1mL含有20 mM DMP（dimetylpimelimidate dihydrochloride）的交聯液， 此試劑需要現用現配。振蕩懸浮，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管， 促使溶液和磁珠充分接觸，約30min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清 后，吸棄上清液。

4）使用1mL終止液懸浮磁珠，終止交聯反應，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管，促使溶液和磁珠充分接觸，約15min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。

5）加入1mL平衡液，顛倒混勻，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。再重復兩次。

 

6. 抗原結合反應

1) 加入含有抗原的樣品（通常100-1000μL)，用移液器輕輕吹打使抗原與磁珠-抗體復合物均勻分散。

2) 在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管 10min，使抗原與抗體充分結合，如結合力較弱則可在室溫下反應1h或者在4℃下反應過夜。

3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗體-抗原復合物進行磁性分離，收集上清液，以備后續檢測。

4) 向離心管中加入1mL洗雜液，用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體-抗原復合物均勻分散，然后進行磁性分離，棄上清液；從磁分離器上取下離心管，再重復洗滌兩次。

 

7．抗原洗脫

A. 變性洗脫 此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。

1) 從磁分離器上取下離心管，向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻， 95℃加熱 5min。

2) 置于磁性分離器上，進行磁性分離，收集上清液進行SDS-PAGE檢測。

B. 非變性洗脫

1) 向磁珠-抗體-抗原復合物中加入50 μL 洗脫液，混合均勻，室溫孵育5min。

2) 置于磁性分離器上，進行磁性分離，收集洗脫液至新的 EP 管中。

3) 重復步驟 1）和2），收集洗脫液，與2）中洗脫液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

HB210916