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    Protein A/G MagBeads(IP Grade) 蛋白A/G免疫磁珠

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息

     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    rProtein A/G MagBeads (IP Grade) 蛋白A/G免疫磁珠

    36417ES03

    1mL

    787.00

    36417ES08

    5mL

    2937.00

     

    產品描述

     

    Protein A/G免疫沉淀磁珠使用納米表面生物技術”(S-TEC),將Protein A/G高密度定向包被到超順磁性聚合物微球表面,具有更高的抗體結合能力和極低的蛋白非特異性吸附率,一步純化即可從血清樣品中分離出純度>90%的抗體,使用簡便有效。天然蛋白AProtein A)是一種發現于金黃色葡萄球菌的細胞壁表面蛋白,天然蛋白GProtein G)是一種分離自G型或C型鏈球菌屬的細胞表面蛋白,二者功能相似,主要通過與免疫球蛋白(Ig)的Fc區相互作用,可結合大多數哺乳動物的IgG,但在兩者結合特異性上有所不同(詳見附錄)。Protein A/G免疫磁珠同時共價偶聯了蛋白A和蛋白G,比單獨的蛋白A或者蛋白G都有更廣的結合范圍,實用性更高。同時,本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G,不僅維持其本身的Ig親和特性,同時也去除了天然蛋白本身的非主要結合域以降低非特異性結合。本品適用的范圍廣泛,可應用于細胞裂解液、細胞分泌液上清、血清、動物腹水以及其它的免疫抗原等樣本。

     

    產品性質

     

    基質(Matrix spherical

    聚合物磁性微球

    配體(Ligand

    重組Protein A/G

    結合能力Binding Capacity

    50µg hIgG /mg

    粒徑 Particle size

    1μm

    磁珠濃度Concentration

    10mg/mL

    儲存緩沖液Storage Buffer

    PBS,0.01% Tween-20, 0.02% NaN3

    應用(Application

    rProtein Purification, Immunoprecipitation

     

    運輸和保存方法

     

    低溫運輸。4℃長期儲存,有效期2。

     

    注意事項

     

    1為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。本產品僅作科研用途!

     

    使用方法

     

    工作液濃度應根據具體實驗確定,建議進行預實驗摸索最佳實驗濃度。

     

    1. 緩沖液配制

    平衡/結合/ 洗雜液:

    0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

    交聯液:

    0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2

    中和緩沖液:

    1M Tris-HCl,pH 8.5

    洗脫緩沖液:

    終止液:

    0.1M 甘氨酸,pH 3.0

    50 mM Tris, pH 7.5

     

    2. 抗原樣品制備

    本操作說明書提供以下四種樣品處理方法,建議您根據不同來源的抗原樣品選擇適當的方式進行預處理,使待檢測抗原釋放至樣品溶液中。

    血清樣品處理:若目標蛋白豐度較高, 建議用結合緩沖液稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為10-100µg/mL,置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

    懸浮細胞樣品處理:離心收集細胞(4℃, 500g, 10min),棄上清后稱重,按每毫克細胞50µL的比例用1×PBS洗滌2次;按每毫克細胞5-10µL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑,混勻后置于冰上處理10min;離心收集上清液(4℃, 14000g, 10min),置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

    貼壁細胞樣品處理:移去培養基,按每 1.0×105個細胞150µL的比例用1×PBS洗滌兩次;用細胞刮棒刮脫細胞,收集至1.5mL EP管內,按每 1.0×105個細胞20-30µL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑,混勻后置于冰上處理10min;離心收集上清液(4℃, 14000g, 10min),置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。

    大腸桿菌樣品處理 離心收集大腸桿菌(4℃, 12000g, 2min), 棄上清后稱重, 按每克(濕重)菌體10mL的比例用1×PBS洗滌2次;按每克(濕重)菌體5-10mL的比例加入結合緩沖液,同時加入蛋白酶抑制劑,重懸菌體,超聲裂解細胞,離心收集上清(4℃, 17000g, 10min)。

     

    3. 磁珠預處理將磁珠漩渦振蕩1min,使其充分混懸;取25-50µL(相當于50-100µg)磁珠懸液置于1.5mL EP管中。加入200µL結合緩沖液洗滌,進行磁性分離,吸棄上清,重復1次。加入200 µL結合緩沖液重懸磁珠備用。

     

    4. 抗體吸附

    1) 加入 100 μL平衡液將磁珠懸浮,加入目標抗體溶液,充分混勻。

    2) 室溫孵育 10min,可以振蕩或漩渦混合均勻。

    3) EP 管置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。如需要可留做進一步檢測。

    4) 加入500μL 洗雜液混合均勻,置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。重復 洗雜至少 3次。

     

    5. 抗體交聯 (備選)

    1) 如果需要將抗體和目標抗原復合物共同洗脫,請忽略本步驟,直接進行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步驟操作,無需額外增加交聯液體積。

    2)加入 1mL交聯液,振蕩懸浮,置于磁分離器上,大約1min,待溶液變澄清后,吸棄上清液。該操作重復兩次。

    3)再加入1mL含有20 mM DMPdimetylpimelimidate dihydrochloride)的交聯液, 此試劑需要現用現配。振蕩懸浮,在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管, 促使溶液和磁珠充分接觸,約30min后,置于磁分離器上,大約 1min,待溶液變澄清 后,吸棄上清液。

    4)使用1mL終止液懸浮磁珠,終止交聯反應,在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管,促使溶液和磁珠充分接觸,約15min后,置于磁分離器上,大約 1min,待溶液變澄清后,吸棄上清液。

    5)加入1mL平衡液,顛倒混勻,置于磁分離器上,大約 1min,待溶液變澄清后,吸棄上清液。再重復兩次。

     

    6. 抗原結合反應

    1) 加入含有抗原的樣品(通常100-1000μL),用移液器輕輕吹打使抗原與磁珠-抗體復合物均勻分散。

    2) 在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管 10min,使抗原與抗體充分結合,如結合力較弱則可在室溫下反應1h或者在4℃下反應過夜。

    3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗體-抗原復合物進行磁性分離,收集上清液,以備后續檢測。

    4) 向離心管中加入1mL洗雜液,用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體-抗原復合物均勻分散,然后進行磁性分離,棄上清液;從磁分離器上取下離心管,再重復洗滌兩次。

     

    7.抗原洗脫

    A. 變性洗脫 此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。

    1) 從磁分離器上取下離心管,向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻, 95℃加熱 5min。

    2) 置于磁性分離器上,進行磁性分離,收集上清液進行SDS-PAGE檢測。

    B. 非變性洗脫

    1) 向磁珠-抗體-抗原復合物中加入50 μL 洗脫液,混合均勻,室溫孵育5min。

    2) 置于磁性分離器上,進行磁性分離,收集洗脫液至新的 EP 管中。

    3) 重復步驟 1)和2),收集洗脫液,與2)中洗脫液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。

    HB210916

     

    400-6111-883

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