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    Streptavidin(SAV) MagBeads 鏈霉親和素(SAV)免疫磁珠

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    產品說明書

    FAQ

    COA

    已發表文獻

    產品信息
     

    產品名稱

    產品編號

    規格

    價格(元)

    Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素(SAV)免疫磁珠

    47503ES03

    1 mL

    728


    產品描述
     

    鏈霉親和素(streptavidin)是一種來源于阿維丁鏈霉菌由四個相同亞基組成的生物素結合蛋白質,每個亞基均有一個與生物素有高親和力的結合位點。生物學上常將鏈霉親和素包被在磁珠上,借鏈霉親和素-生物素高親和力結合特性,結合生物素化蛋白,多肽,及非蛋白質(如各種DNA、RNA分子)等分子,進而從混合體系中快速分離生物素化成分,進行如親和純化,細胞分離,DNA探針分析和mRNA分離等多方面應用。

    本品streptavidin磁珠可配合實驗需要選擇生物素標記的各種單抗去分離細胞,應用范圍廣泛,使用靈活。其原理是在實驗系統中加入生物素標記的單抗,磁珠通過streptavidin與生物素標記的單抗結合后,單抗與細胞表面相應抗原特異性結合而使細胞被磁珠間接捕獲,從而達到純化分離細胞的目的。


    產品性質
     

    磁珠含量

    10 mg/mL

    磁珠粒徑

    1 µm

    結合能力

    20μg biotinylated IgG/mg磁珠

    儲存緩沖液

    PBS, 1% Tween-20, 0.02% NaN3


    運輸和保存方法
     

    冰袋運輸。4℃保存,兩年有效。


    注意事項

    1)免疫磁珠易沉降聚集,因此產品使用前要劇烈振蕩或超聲處理。
    2Fc受體(FcR)封閉:在某些實驗中,部分抗體會通過其Fc段與不同細胞表面的FcR 結合,出現非特異性反應。此時可預先將細胞與IgG 或針對FcR的特異性抗體室溫孵育5-10 min,一般107細胞中可加入1-10 µg IgGFcR 的特異性抗體進行封閉。
    3)如果分選的細胞進一步用作細胞培養實驗,所有步驟都需在無菌環境及條件下進行。
    4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
    5)本產品僅作科研用途!


    使用方法


    一、本操作流程以純化生物素化分子(核酸、蛋白、抗體)為例,可根據需要適當的增加或減少磁珠使用量

    1.1磁珠準備
    1.1.1Streptavidin (SAV) MagBeads顛倒或漩渦混合均勻。
    1.1.2 100 ul Streptavidin (SAV) MagBeads加入新的離心管中。放置在磁分離器上,待溶液變澄清后,用移液器吸棄保護液。
    1.1.3 將離心管從磁分離器上取下來,加入500清洗緩沖液,混勻,放置在磁分離器上,收集磁珠,用移液器吸棄保護液。重復洗2次。
    推薦清洗緩沖液:核酸樣品:TES緩沖液 (10 mM Tris-Cl (pH 7.5), 1 mM EDTA (pH 7.5), 0.1 % (m/V) SDS)
    抗體/蛋白樣品:PBS緩沖液, pH7.40.1 M Phosphate, 0.15 M NaCl, pH 7.0

    1.2生物素化分子固定
    1.2.1需要準備的試劑
    生物素化樣品平衡/洗雜液:核酸樣品:TES緩沖液 (10 mM Tris-Cl (pH 7.5), 1 mM EDTA (pH 7.5), 0.1 % (m/V) SDS)
    抗體/蛋白樣品:PBS緩沖液, pH7.4 0.1 M Phosphate, 0.15 M NaCl, pH 7.0
    1.2.2操作流程
    1)加入100 μL平衡液(1.2.1)將磁珠懸浮。
    2)加入適量生物素化樣品溶液,充分混勻。
    3)室溫孵育1h以上(具體時間根據結合效果調整),可以振蕩或漩渦混合均勻。
    4)將離心管置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。如有需要可留做進一步檢測。
    5)加入1 mL洗雜液(1.2.1)混合均勻,置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。重復洗雜至少3次。
    6)用下游實驗用的溶液,將固定好生物素化分子的磁珠重新懸浮至合適濃度,以備后續使用。下面以固定抗體后純化抗原為例

    1.3抗原的純化
    1.3.1試劑準備
    生物素化抗體
    平衡液/洗雜液:0.1 M Phosphate,0.15 M NaCl, pH 7.0
    洗脫液:0.1 M Glycine-HCl, pH 2.5-2.8
    中和液:1M Tis-HCl, pH 8.5
    1.3.2純化流程
    1100 μL的磁珠(步驟1.2中已經固定好生物素抗體的磁珠)加入離心管,置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。
    2加入1mL平衡液(1.3.1)混合均勻,置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。重復洗雜至少3次。
    3)向上一步準備好的磁珠中,加入抗原樣品輕輕的混合均勻,體積不足200 μL用抗原溶液補足。室溫孵育30 min以上或者4℃過夜,確保磁珠充分懸浮以免影響吸附效果。
    4)加入1mL洗雜液(1.3.1)混合均勻,置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸棄上清液。重復洗雜至少3次。
    5)加入300-500 μL洗脫液(1.3.1)混合均勻,室溫孵育5 min。
    6)將離心管置于磁分離器上,待磁珠全部吸附后,吸取含抗原樣品的上清液。如有需要可留做進一步檢測。
    7)加入洗脫體積十分之一的中和液中和。100 μL洗脫液中加入10 μL中和液中和。
    8)如有需要可重復步驟5-7兩次,增加洗脫效率。

     

    二、本操作流程以用于細胞分選為例,可根據需要適當的增加或減少磁珠使用量
    由于不同抗體的親和力,欲分離細胞在混合體系中所占比例以及細胞表面靶抗原密度的差異,操作流程中所提供的相關參數不一定適用于所有的細胞分選實驗。因此實驗前應對生物素化抗體使用濃度,磁珠與細胞反應比例,及反應時間進行滴定,優化以達到最佳的細胞分選效果。

    2.1磁珠分選緩沖液:含有0.5% BSA, 2 mM EDTA, 0.09% NaN3PBS, pH7.4

    2.2 操作流程
    2.2.1分離單細胞:使用淋巴細胞分離液從抗凝血中提取外周血單個核細胞(PBMC),或者從淋巴組織中制備單細胞懸液。PBMC用含5%BSA,0.09%NaN3PBS,pH7.4 3次,40-70 µm尼龍網過濾去除細胞團塊和碎片后調整細胞數為2-3×107/mL。
    【注】:反應體系中加入5-10%BSA蛋白可降低非特異性反應,但蛋白濃度太高會降低分選效率。

    2.2.2 PBMC 中加入適量生物素化抗體,一般1×107 PBMC 中加入0.5-10 µg 抗體,室溫反應30 min。
    2.2.3 1000 rpm離心5 min,棄上清中未結合的生物素化抗體。加入1 mL磁珠分選緩沖液重懸細胞,1000 rpm 離心5 min,棄上清,洗2次。
    2.2.4 1 mL磁珠分選緩沖液重懸細胞,將細胞與50 µL免疫磁珠混合,室溫反應30 min,間隔10 min輕輕晃動反應管,避免磁珠沉淀,使磁珠與細胞充分反應,盡量防止出現氣泡。之后進入后續細胞分選。
    2.2.5 細胞分選

    1陰性分選 (Negative Selection)

     磁分器分離5-8 min,收集未被免疫磁珠結合的細胞懸液至另一干凈管中。

     加入1 mL磁珠分選緩沖液重懸磁珠,用玻璃滴管或移液槍槍頭反復吹打磁珠。

     重復步驟,合并兩次收集的細胞懸液,可將細胞懸液再置磁分離器分離 5-8 min,可明顯增加靶細胞純度。

    2陽性分選 (Positive Selection)

     磁分離器分離5- 8 min,去除未與磁珠結合的細胞。
     結合了靶細胞的免疫磁珠用1 mL 磁珠分選緩沖液洗5次(5×1 mL)后,可直接進行流式檢測,或者37℃培養48 h可使細胞與磁珠分離。

     

    HB220928

     

    400-6111-883

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