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    如何使用潮霉素B篩選穩轉株-----潮霉素B的應用

    潮霉素B的作用原理

    潮霉素B(Hygromycin B)是一種氨基糖苷類抗生素,由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產生,通過破壞易位和促進80S核糖體的錯讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

    目前常用于篩選和維持培養含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。

     

    潮霉素B的應用

    ● 篩選和維持培養穩定轉染Hph+載體的原核或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞)

    大腸桿菌(Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉移酶,將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物,從而起到解毒作用。針對這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記,用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。

    ● 由于作用模式的差異,潮霉素B常與遺傳霉素G418,博來霉素和殺稻瘟菌素s聯合使用,篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株

    它的作用模式與G418 (Cat#60220ES)、博來霉素(Cat#60257ES)和殺稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同,所以非常適合在雙選實驗中與另一種選擇性抗生素聯合使用。

    ● 抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效

    ● 作為驅蟲藥加入動物飼料中,飼養動物

    ● 潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。一般而言,哺乳動物細胞50-500 μg/mL;細菌/植物細胞20-200 μg/mL;真菌200-1000 μg/mL。

     

    潮霉素B的實驗步驟

    ● 鋪板:細胞培養至80-90%融合時,棄掉培養基,用1-2 mL PBS洗滌細胞兩次,加入1mL Trypsin-EDTA溶液,充分洗滌細胞后,加入適量的胰蛋白酶消化液,將培養皿于37oC放置數分鐘使其在鏡下大部分變圓即可終止消化,鋪板密度約30%左右于5% CO2 37oC 過夜培養。

    ● 根據細胞類型,設定合適的濃度梯度。如哺乳動物細胞,可設定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根據儲存液的濃度進行對應的稀釋操作。

    ● 維持Hygromycin B 濃度,隔天換液,鏡下觀察。7 天后,選擇能將未轉化的細胞完全殺死的最低Hygromycin B 濃度,為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

     

    化學性質

    潮霉素B是類白色至微黃褐色粉末,有特殊氣味,為弱堿,易溶于水、甲醇、乙醇等,易與許多有機酸和無機酸生成鹽。

     

    保存方法

    溶液直接存放在2℃~8℃,可存放6個月以上。

     

    注意事項

    ● 攜帶hph基因轉染的細胞對潮霉素有抗性,轉染細胞穩定或暫時表達該基因。

    ● 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來自E. Coli.之外,還發現于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

     

    產品推薦

    翌圣生物的潮霉素B提供兩種狀態的產品,粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL),貨號分別為60225ES、60224ES。

     

    產品名稱          

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價(元)

    Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B(50 mg/mL)

    60224ES03

    1 g (20 mL)

    849.00

    536.00

    Hygromycin B (50 mg/mL) 潮霉素B(50 mg/mL)

    60224ES10

    10×1 g (20 mL)

    7396.00

    4696.00

     

    產品名稱          

    產品編號

    規格

    價格(元)

    促銷價(元)

    Hygromycin B 潮霉素B

    60225ES03

    1 g

    719.00

    419.00

    Hygromycin B 潮霉素B

    60225ES10

    10 g

    6599.00

    3999.00

     

    客戶使用該產品發表的科研文獻(不完全統計:部分)

    [1] Zhu G, Yu J, Sun Z, et al. Genome-wide CRISPR/Cas9 screening identifies CARHSP1 responsible for radiation resistance in glioblastoma[J]. Cell death & disease, 2021, 12(8): 1-9.  IF: 8.469

    [2] Wang L, Wu W, Zhu X, et al. The ancient Chinese decoction Yu-Ping-Feng suppresses orthotopic Lewis lung cancer tumor growth through increasing M1 macrophage polarization and CD4+ T cell cytotoxicity[J]. Frontiers in Pharmacology, 2019, 10: 1333.  IF: 5.810

    [3] Huang H, Zhong L, Zhou J, et al. Leydig‐like cells derived from reprogrammed human foreskin fibroblasts by CRISPR/dCas9 increase the level of serum testosterone in castrated male rats[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2020, 24(7): 3971-3981.  IF: 5.310

    [4] Huang H, Zou X, Zhong L, et al. CRISPR/dCas9‐mediated activation of multiple endogenous target genes directly converts human foreskin fibroblasts into Leydig‐like cells[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(9): 6072-6084.  IF: 5.310

    [5] Cui Z, Zheng H, et al. Identification and Characterization of the Mitochondrial Replication Origin for Stable and Episomal Expression in Yarrowia lipolytica. ACS Synthetic Biology. 2021 Apr 16;10(4):826-835.  IF: 5.110

    [6] Yao G, Chen X, Han Y, et al. Development of versatile and efficient genetic tools for the marine-derived fungus Aspergillus terreus RA2905[J]. Current Genetics, 2022: 1-12.  IF: 3.695

    [7] Wang W Q, Tang W H. Generation of Fusarium graminearum Knockout Mutants by the Split-marker Recombination Approach[J]. Bio-protocol, 2018: e2976-e2976.

    [8] An C, Wang M, Yao W. Exhausting hsa_circ_0072088 restrains proliferation, motility and angiogenesis of breast carcinoma cells through regulating miR-1236-3p and RRM2 in a ceRNA pathway[J]. Clinical Breast Cancer, 2022.  IF: 3.225



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